大肠杆菌Origami B（DE3)菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。

1. 大肠杆菌Origami B（DE3)菌种培养试剂的保存：

血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

培养基: 2oC – 8oC避光保存。

完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

尽量缩短血清和培养基见光的时间

2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Origami B（DE3)菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

大肠杆菌Origami B（DE3)菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类***的作用，特别是雌***。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC1011GT38人胃癌细胞人1640贴壁

EC1012GT39人胃癌细胞人1640贴壁

EC1013HECerEpiEC人正常子宫颈上皮细胞人

EC1014REC92A人前列腺干细胞人IMDM贴壁

EC1015SLK卡波西肉瘤细胞人DMEM贴壁

EC1016HMECB人黑色素瘤细胞人DMEM贴壁

EC1017EAEC-E2G8小鼠腹水瘤细胞小鼠IMDM半贴壁

EC1018IPEEC-1猪小肠上皮细胞猪1640贴壁

EC1020HDF-a***真皮成纤维细胞人

EC1021HPEC-Y5人胰腺细胞人DMEM贴壁

EC1022NEEC人食管癌细胞人DMEM贴壁

EC1023OVSAHO人卵巢癌细胞人DMEM贴壁

EC1024HMO6人小胶质细胞人DMEM贴壁

EC1025SNU119人卵巢癌细胞人1640贴壁

EC1026KM933EB病毒转化的人B淋巴细胞人1640悬浮

EC1027AN3ECA人子宫内膜腺癌(转移)细胞人EMEM贴壁

EC1028HA人星形胶质细胞人DMEM贴壁

EC1029NECI-H2591 人肺癌细胞人1640贴壁

EC1030LM8EC3H小鼠骨肉瘤细胞小鼠DMEM贴壁

EC1031MuM-2EC人眼脉络黑色素瘤细胞人DMEM贴壁

EC1032L2大鼠肺泡上皮细胞大鼠

EC10333AO人卵巢癌细胞人1640贴壁

EC1034hECMEECs人心脏微血管内皮细胞人

EC1035F98大鼠胶质瘤细胞大鼠DMEM贴壁

EC1036EECt1/E6E7人宫颈永生化鳞状细胞人EMEM贴壁

EC1037Hs832.TEC人卵巢良性肿瘤细胞人DMEM贴壁