大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。

1. 大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS菌种培养试剂的保存：

血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

培养基: 2oC – 8oC避光保存。

完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

尽量缩短血清和培养基见光的时间

2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类***的作用，特别是雌***。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC048NIH/3T3小鼠胚胎细胞小鼠DMEM贴壁

EC049Psi2 DAP小鼠胚胎成纤维细胞小鼠

EC050MS1小鼠胰岛内皮细胞小鼠

EC051SV40 MES 13小鼠肾小球系膜细胞小鼠

EC052OP9小鼠骨髓基质细胞小鼠1640贴壁

EC053C2C12小鼠成肌细胞小鼠DMEM贴壁

EC054NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]小鼠成纤维细胞小鼠

EC055TM3小鼠睾丸间质细胞小鼠

EC056B95-8绒猴EBV转化的白细胞绒猴

EC057Mv.1.Lu(NBL-7)貂肺上皮细胞貂

EC058OK负鼠肾细胞负鼠

EC059NRK大鼠肾细胞大鼠

EC060NRK-52E大鼠肾细胞大鼠DMEM贴壁

EC061BRL大鼠肝细胞大鼠

EC062BRL 3A大鼠肝细胞大鼠DMEM贴壁

EC063NR8383大鼠肺泡巨噬细胞大鼠F12K贴壁+悬浮

EC064A7r5大鼠胸大动脉平滑肌细胞大鼠DMEM贴壁

EC065H9c2(2-1)大鼠心肌细胞大鼠DMEM贴壁

EC066L6大鼠成肌细胞大鼠DMEM贴壁

EC067RSC96大鼠雪旺细胞大鼠DMEM贴壁

EC068RF/6A猴脉络膜-视网膜(内皮)细胞恒河猴DMEM贴壁

EC069FRhK-4恒河猴胚肾细胞恒河猴DMEM贴壁

EC070LLC-MK2恒河猴肾细胞恒河猴1640贴壁